Ultrafiltrasiýa merkezden gaçyryş turbasynyň ulanylyşy we seresaplyklary
1) laýyk ultrafiltrasiýa turbasyny saýlaň.UF membranalarynyň dürli himiki maddalara çydamlylyk derejesinde tapawutlanýandygyna üns beriň.Adatça, 10 kDa molekulýar agramy kesilen ultrafiltrasiýa turbalary, 35 kDa ýaly gyzyklanma belogynyň molekulýar agramynyň 1/3-den köp bolmaly däl molekulýar agramy bilen saýlanyp bilner.Gyzykly belogyň molekulýar agramy 10 kd töweregi bolsa, 3 KD molekulýar agramy kesilen ultrafiltrasiýa turbasy ulanylyp bilner.
.Soňra suw guýulýar, ýagny belok suwuklygy we näçeräk goşulýar, haýsy turbanyň ýokarsyndaky ak çyzykdan köp däl.Amal ýeňil we belok erginini goşmazdan ozal ultrafiltrasiýa turbasy buzda öňünden sowulmalydyr.
3) Massa hem, agyrlyk merkezi hem deňagramlylyga ýetmeli.Aýlanma tizliginiň we tizlenmesiniň gaty çalt däldigine üns beriň, ýogsam ultrafiltrasiýa membranasyna gönüden-göni zeper ýetirýär.Merkezden gaçyryş ultrafiltrasiýasy başlandy (sentrifuga 4 dereje öňünden sowuldy).Dürli sentrifugalaryň RPM g-e öwrülenden soň, başgaça boldy.Merkezden gaçyryşyň tizlenmesi, membranadaky basyşy azaldyp, iň az derejede düzedildi.Üns beriň, merkezden gaçyryş nokadyna ýetenden soň, sentrifugany taşlamagy unutmaň, ýa-da kynçylyk çekseňiz, ilkinji gezek çözüp bilmersiňiz.Membrananyň şpilka ugrukdyrylyşy görkezmelere laýyklykda düzüldi (burç merkezden gaçyryş korpusy perpendikulýar ok üçin membranadyr).Amaly ulanylanda, merkezden gaçyryş turbasynyň ömri uzaldylyp bilner ýaly, umumy aýlanma tizligi görkezmelerden has pesdir.
3) Massa hem, agyrlyk merkezi hem deňagramlylyga ýetmeli.Aýlanma tizliginiň we tizlenmesiniň gaty çalt däldigine üns beriň, ýogsam ultrafiltrasiýa membranasyna gönüden-göni zeper ýetirýär.Merkezden gaçyryş ultrafiltrasiýasy başlandy (sentrifuga 4 dereje öňünden sowuldy).Dürli sentrifugalaryň RPM g-e öwrülenden soň, başgaça boldy.Merkezden gaçyryşyň tizlenmesi, membranadaky basyşy azaldyp, iň az derejede düzedildi.Üns beriň, merkezden gaçyryş nokadyna ýetenden soň, sentrifugany taşlamagy unutmaň, ýa-da kynçylyk çekseňiz, ilkinji gezek çözüp bilmersiňiz.Membrananyň şpilka ugrukdyrylyşy görkezmelere laýyklykda düzüldi (burç merkezden gaçyryş korpusy perpendikulýar ok üçin membranadyr).Amaly ulanylanda, merkezden gaçyryş turbasynyň ömri uzaldylyp bilner ýaly, umumy aýlanma tizligi görkezmelerden has pesdir.
(4) Galan 1ml jemlenende, 50ul bufer erginini alyň, 10ul akym goşuň we ultrafiltrasiýa turbasynyň belok ýoklugyna höküm hökmünde gök reňkiň bardygyny ýa-da ýokdugyny görüň.Turba syzýan bolsa, ultrafiltrasiýa başlamak üçin ýokarky gatlagy we akymy täze turba guýuň.Turbalaryň ýitirilendigini ýa-da ýokdugyny anyklamak üçin, akymdan öň 5mgml BSA bilen 10 minut üçin sentrifuga, belok ýeliminde ýa-da Bredford çig analizinde işleýär we galan konsentrirlenen belok erginini (buzda işleýär we beloklaryň gyzmagynyň öňüni alýar) dowam etdiriň. konsentratlaryň hemmesi goşuldy.Turbanyň ýapylmagyna sebäp bolýan beloklaryň ýagmagy ýüze çyksa, merkezden gaçyryş wagtynda seresap boluň.Ygalyň döremegi ýüze çyksa, ygalyň anyk sebäbiniň aşa köp belok konsentrasiýasydygyny ýa-da ýerliksiz buferdigini kesgitläň;Öňküsi bir wagtyň özünde birnäçe ultrafiltrasiýa turbalarynyň ultrafiltrasiýasy bilen, konsentrasiýany peseltmek, ikinjisi bolsa belok ýagýança dürli bufer erginlerini alyş-çalyş etmek arkaly çözülip bilner.
(4) Galan 1ml jemlenende, 50ul bufer erginini alyň, 10ul akym goşuň we ultrafiltrasiýa turbasynyň belok ýoklugyna höküm hökmünde gök reňkiň bardygyny ýa-da ýokdugyny görüň.Turba syzýan bolsa, ultrafiltrasiýa başlamak üçin ýokarky gatlagy we akymy täze turba guýuň.Turbalaryň ýitirilendigini ýa-da ýokdugyny anyklamak üçin, akymdan öň 5mgml BSA bilen 10 minut üçin sentrifuga, belok ýeliminde ýa-da Bredford çig analizinde işleýär we galan konsentrirlenen belok erginini (buzda işleýär we beloklaryň gyzmagynyň öňüni alýar) dowam etdiriň. konsentratlaryň hemmesi goşuldy.Turbanyň ýapylmagyna sebäp bolýan beloklaryň ýagmagy ýüze çyksa, merkezden gaçyryş wagtynda seresap boluň.Ygalyň döremegi ýüze çyksa, ygalyň anyk sebäbiniň aşa köp belok konsentrasiýasydygyny ýa-da ýerliksiz buferdigini kesgitläň;Öňküsi bir wagtyň özünde birnäçe ultrafiltrasiýa turbalarynyň ultrafiltrasiýasy bilen, konsentrasiýany peseltmek, ikinjisi bolsa belok ýagýança dürli bufer erginlerini alyş-çalyş etmek arkaly çözülip bilner.
. yzygiderli konsentrirlenen jemleýji göwrüm bilen islenýän belok konsentrasiýasyna baglylykda, adatça 500uldan köp däl, 200ul aralygynda.Her gezek azyndan 10 × ýa-da şunuň ýaly baýlaşdyryş bilen hasaplanylanda üç gezekde 1000 × ýa-da has köp üstünlik gazanyň.
. yzygiderli konsentrirlenen jemleýji göwrüm bilen islenýän belok konsentrasiýasyna baglylykda, adatça 500uldan köp däl, 200ul aralygynda.Her gezek azyndan 10 × ýa-da şunuň ýaly baýlaşdyryş bilen hasaplanylanda üç gezekde 1000 × ýa-da has köp üstünlik gazanyň.
Iş wagty: Noýabr-09-2022